Erinevus kloonimise ja subkloonimise vahel

Peamine erinevus - kloonimine vs subkloonimine
 

Kloonimine ja subkloonimine on molekulaarbioloogilised protseduurid, mis loovad geneetiliselt identsed rakud või organismid, mis kannavad huvipakkuvat DNA-d või geeni. Kloonimine on tehnika, mis hõlmab huvitatud geeni või DNA sisestamist vektorisse, selle replikatsiooni peremeesbakteris ja rakkude või organismide tootmist, mis on geneetilise ülesehituse täpsed koopiad. Subkloonimine on tehnika, mis hõlmab huvipakkuva geeni, mis on juba sisestatud vektorisse, sisestamist sekundaarsesse vektorisse, selle replikatsiooni peremeesbakteris ja geneetiliselt identsete rakkude või organismide koopiate valmistamist. Peamine erinevus kloonimise ja subkloonimise vahel on see, kloonimisel jätkavad huvipakkuvad geenid, kui need on ligeeritud vektorisse, kloonimisprotsessi, subkloonimisel eraldatakse juba huvipakkuv huvipakkuv geen lähtevektorist ja sisestatakse uuesti retsipiendivektorisse ning jätkake protsessi.

SISU
1. Ülevaade ja peamised erinevused
2. Mis on kloonimine
3. Mis on subklonimine
4. Kõrvuti võrdlus - kloonimine vs subkloonimine
5. Kokkuvõte

Mis on kloonimine?

Kloonimine on protseduur, mille käigus saadakse geneetiliselt identsed organismid või rakud. Looduses toimub kloonimine aseksuaalse paljunemise teel. Kui geneetilist rekombinatsiooni või muutust ei toimu, saavad tütarrakud vanema geneetilise ülesehituse. Prokarüootsed ja eukarüootsed organismid loovad kloone binaarse lõhustumise, punkerdamise, mitoosi jms abil. Molekulaarbioloogias on geenide või DNA spetsiifiliste fragmentide kloonimine populaarne meetod selle konkreetse DNA sektsiooni struktuuri ja funktsiooni uurimiseks..

Molekulaarse kloonimise peamine eesmärk on teha miljoneid koopiaid geneetiliselt identsetest rakkudest või organismidest, mis kannavad huvipakkuvat DNA fragmenti (peamiselt geene). See loob organisme, millel on teise inimese täpsed geneetilised koopiad. Esiteks kloonitakse spetsiifilised geenid molekulaarsetes uuringutes, et saada struktuurset ja funktsionaalset teavet ning DNA järjestust. Samuti kasutatakse laialdaselt spetsiifiliste valkude või toodete tootmiseks suurtes kogustes kloonimist.

Kloonimisprotseduur

Kloonimisprotseduuri põhietapid on järgmised.

1. Huvipakkuva geeni identifitseerimine ja eraldamine. (Huvipakkuva geeni amplifikatsioon PCR abil).
2. Huvipakkuva geeni restriktsiooni lagundamine (restriktsiooni endonukleaas lõikab geeni).
3. Vektori DNA piirav lagundamine. (Vektor-DNA lõigatakse ka sama restriktsiooni endonukleaasi kasutades).
4. Geeni sisestamine vektorisse ja rekombinantse molekuli moodustamine.
5. Rekombinantse vektori muundamine peremeesbakteriks.
6. Transformeeritud bakterite eraldamine ja identifitseerimine (plasmiidivektor peaks sisaldama valitavat geeni, kõige sagedamini antibiootikumiresistentsuse geeni transformeeritud bakterite sõelumiseks).
7. Rekombinantse geeni ekspressioon peremeesorganismis.

Joonis_01: kloonimisprotseduur

Mis on subklonimine?

Subkloonimine on protseduur huvipakkuva geeni viimiseks ühest vektorist teise vektorisse, et näha geeni ekspressiooni, et saada geeni soovitud funktsionaalsus. Selle meetodi puhul on kaasatud kaks vektorit; nimelt algvektor ja sihtvektor. Kloonitud insertid viiakse subkloneerimisel uuesti teise vektorisse. Geeni esimesest vektorist teise vektorisse ülekandmise eesmärk on saada midagi, mida esimene vektor ei saaks teha, või eraldada geen juba kloonitud DNA fragmendis ja ekspresseerida seda üksi. Selle protseduuri alguses kasutatakse restriktsiooniensüüme.

Subkloonimise protseduur

Subkloonimise põhietapid on järgmised.

1. Restriktsiooni endonukleaaside abil eraldatakse huvipakkuv DNA doonori plasmiidis (lähtevektor).
2. Huvipakkuva DNA amplifitseerimine PCR abil.
3. PCR produkti (huvipakkuv DNA) puhastamine geelelektroforeesil.
4. Retsipiendi plasmiidi avamine samade restriktsiooni endonukleaasidega, mida kasutatakse huvipakkuva DNA eraldamiseks lähteplasmiidis.
5. Huvipakkuva DNA (geeni) ligeerimine retsipiendi plasmiidi, subkloonitud plasmiidi saamiseks.
6. Subkloonitud vektori muundamine pädevaks peremeesbakteriks.
7. Transformeeritud rakkude sõelumine.
8. Plasmiidse DNA puhastamine ja kasutamine DNA järjestamiseks või geenide ekspresseerimiseks soovitud saaduste saamiseks.

Subkloonimine viiakse läbi juhul, kui isoleeritakse üks geen kloonitud geenirühmast või kui huvipakkuv geen on vajalik ülekandmiseks kasulikku plasmiidi, et näha huvipakkuva geeni täpset funktsiooni.

Joonis_02: subkloonimise protseduur

Mis vahe on kloonimisel ja subkloonimisel??

Kloonimine vs subkloonimine
Kloonimine on protseduur, mille käigus saadakse geneetiliselt identsed organismid või rakud.	Subkloonimine on protseduur huvipakkuva geeni viimiseks ühest vektorist teise vektorisse, et näha geeni ekspressiooni, et saada geeni soovitud funktsionaalsus.
Protsess
Eraldage huvipakkuv DNA organismist, sisestage üks kord vektorisse ja kloonige	Juba kloonitud DNA eraldatakse esimesest vektorist, sisestatakse teise vektorisse ja kloonitakse.
Lisage liikumine vektorite kaudu
Ei liigu inserte (huvipakkuv DNA) ühest vektorist teise.	Liiguta lisamised algvektorist sihtvektorisse.

Kokkuvõte - kloonimine vs subkloonimine

Kloonimisega luuakse huvipakkuva geeni või DNA-ga geneetiliselt identsed rakud või organismid. See toimub huvipakkuva DNA eraldamise ja sisestamise kaudu vektorisse ning ekspressioonis peremeesbakteris. Subkloonimine jagab kloonimisega sarnaseid samme. Subkloonimisel sisestatakse juba kloonitud DNA fragment (huvipakkuv geen) vektorisse ja muundatakse peremeesbakteriks. See on kloonimise ja subkloonimise peamine erinevus.

Viited

1. Lodish, Harvey. "DNA kloonimine plasmiidvektoritega." Molekulaarrakkude bioloogia. 4. väljaanne. USA Riiklik Meditsiiniraamatukogu, 1. jaanuar 1970. Veeb. 05. märts 2017
2. “Subkloonimine.” Vikipeedia. Wikimedia Foundation, 14. veebruar 2017. Veeb. 06. märts 2017
3. “Subkloonimine.” Subkloonimine | Avatud juurdepääsuga artiklid | Avatud juurdepääsu ajakirjad | Konverentsi materjalid | Toimetajad | Autorid | Ülevaatajad | teadusüritused. N.p., n.d. Võrk. 06. märts 2017
4. Wackerhage, Henning. "Kuidas subkloonida." Kuidas subkloonida. N., 1. jaanuar 1970. Veeb. 06. märts 2017

Pilt viisakalt

1. Molekulaarse kloonimise protseduur - CNX OpenStaxi [CC BY 4.0] kaudu, Wikimedia Commonsi kaudu
2. Subkloonimise protseduur - autor: Algne üleslaadija oli Takometer inglise Vikipeedias (üle viidud en.wikipediast Commonsi.) [CC BY 2.5], Wikimedia Commonsi kaudu