Erinevus otsese ja kaudse immunofluorestsentsi vahel

võtme erinevus otsese ja kaudse immunofluorestsentsi vahel on see, et otsene immunofluorestsents kasutab ühte antikeha, mis töötab huvipakkuva sihtmärgi vastu, kaudne immunofluorestsents kasutab huvipakkuva sihtmärgi märgistamiseks kahte antikeha.

Immunofluorestsents või rakkude kuvamine on tehnika, mida kasutatakse konkreetse sihtantigeeni märgistamiseks fluorofooriga. Fluorofoor on siin fluorestseeruv keemiline ühend, mis võib valguse ergutamisel valgust uuesti kiirgata. Kui fluorofoor seob sihtantigeeni, võimaldab see proovis sihtmolekuli tuvastada. Selle edasiseks kirjeldamiseks võib antigeeni konjugeerida fluorofooridega, kui antigeen seondub spetsiifilise antikehaga. Seega on fluorestsentsmikroskoobi all jälgimisel lihtne tuvastada sihtantigeeni olemasolu proovis.

Lisaks on immunofluorestsentsi kahte tüüpi; otsene ja kaudne immunofluorestsents. Erinevus otsese ja kaudse immunofluorestsentsi vahel seisneb peamiselt kasutatavate antikehade arvus ja fluorofooride konjugatsioonis. See tähendab, et otsese immunofluorestsentsi korral konjugeerub fluorofoor otse primaarse antikehaga, kaudse immunofluorestsentsi korral konjugeeritud sekundaarse antikehaga fluorofoor.

SISU

1. Ülevaade ja peamised erinevused
2. Mis on otsene immunofluorestsents
3. Mis on kaudne immunofluorestsents
4. Otsese ja kaudse immunofluorestsentsi sarnasused
5. Kõrvuti võrdlus - otsene või kaudne immunofluorestsents tabeli kujul
6. Kokkuvõte

Mis on otsene immunofluorestsents?

Immunofluorestsentsi abil kasutatakse spetsiifiliste sihtantigeenide tuvastamiseks antikehi. Otsene immunofluorestsents on üks kahest immunofluorestsentsi tüübist. Otsese immunofluorestsentsi korral hõlmab üks antikeha (primaarne antikeha) primaarset antikeha ja konjugeeritakse fluorofooriga otse. Antikeha sidumisel sihtantigeeniga eraldab fluorofoor fluorestsentsi, mida saab tuvastada fluorestsentsmikroskoobiga.

Joonis 01: otsene immunofluorestsents

Otsene immunofluorestsents on aga kallis meetod, kuna primaarsed konjugeeritud antikehad on sekundaarsete antikehadega võrreldes kallid. Sellegipoolest ei hõlma see täiendavat sammu, seega lühemat tehnikat. Lisaks väheneb otseses immunofluorestsentsis mittespetsiifiline seondumine. Seetõttu on liikide ristreaktiivsus madal. Kuid tuvastamisel on otsese immunofluorestsentsi tundlikkus nõrk võrreldes kaudse immunofluorestsentsiga .

Mis on kaudne immunofluorestsents?

Kaudne immunofluorestsents on immunofluorestsentsi teine ​​tüüp, mis hõlmab sihtantigeeni märgistamisel kahte tüüpi antikehi nagu primaarsed ja sekundaarsed antikehad. Selle meetodi korral konjugeeritakse fluorofoor sekundaarse antikehaga. Seega hõlmab see tehnika täiendavat sammu.

Joonis 02: immunofluorestsents

Siiski on selle meetodi tundlikkus kõrge, kuna mitmeid fluorofoore saab konjugeerida sekundaarsete antikehadega ja see teeb tuvastamise lihtsamaks. Lisaks on kaudne immunofluorestsents odavam, kuna sekundaarsete antikehade konjugeerimine on odavam ja lihtsam. Võrreldes otsese immunofluorestsentsiga on liikide ristreaktiivsus kaudses meetodis kõrge.

Millised on otsese ja kaudse immunofluorestsentsi sarnasused?

• Need on kahte tüüpi immunofluorestsentstehnikad.
• Primaarsed antikehad ja fluorofoor hõlmavad mõlemat meetodit.
• Samuti toimub mõlemas meetodis antigeeni-antikeha reaktsioon.
• Lisaks kasutab nii otsene kui ka kaudne immunofluorestsents antigeeni tuvastamiseks fluorestsentsmikroskoopi.

Milline on erinevus otsese ja kaudse immunofluorestsentsi vahel?

Immunofluorestsents võib olla otsene või kaudne, tuginedes kasutatavate antikehadega fluorofooride konjugeerimisele. Otsese immunofluorestsentsi korral konjugeeritakse fluorofoor primaarse antikehaga, mis on üksik antikeha, mida see tehnika hõlmab. Vastupidiselt sellele konjugeerub kaudse immunofluorestsentsi korral fluorofoor sekundaarse antikehaga, mis on üks kahest antikeha tüübist, mis selles tehnikas osalevad. Seega on peamine erinevus otsese ja kaudse immunofluorestsentsi vahel antikeha tüüp, mis konjugeerub fluorofooriga.

Järgmine infograafik pakub otsese ja kaudse immunofluorestsentsi erinevuse võrdlust kõrvuti.

Kokkuvõte - otsene vs kaudne immunofluorestsents

Immunofluorestsents on tehnika, mida kasutatakse konkreetsete antigeenide olemasolu tuvastamiseks proovis. Selles tehnikas kasutatakse spetsiifilisi antikehi. Seetõttu konjugeeritakse selles antikehad fluorofooridega, et neid fluorestsentsmikroskoobi abil tuvastada. Lisaks on immunofluorestsentsi kahte tüüpi, nimelt otsene ja kaudne immunofluorestsents. Otsene immunofluorestsents hõlmab ühte antikeha ja selle antikehaga otseselt konjugeeritud fluorofoori. Kaudne immunofluorestsents hõlmab kahte antikeha; primaarne ja sekundaarne ning sekundaarse antikehaga konjugeeritud fluorofoor. Kuna mitu sekundaarset antikeha võivad seostuda primaarse antikehaga ja mitmed fluorofoorid võivad konjugeeruda sekundaarsete antikehadega, on kaudne immunofluorestsents tundlikum meetod kui otsene meetod. Lisaks on kaudne meetod odavam kui otsene meetod. Seega on see erinevus otsese ja kaudse immunofluorestsentsi vahel.

Viide:

1. Immunofluorestsents. Wikipedia, Wikimedia Foundation, 19. august 2018. Saadaval siin 

Pilt viisakalt:

1. “HSP IF IgA” Emmanuelm saidil en.wikipedia, (CC BY 3.0) Commons Wikimedia kaudu
2. “Immunofluorestsents” - autor Westhayl618 - Oma töö, (CC BY-SA 4.0) Commonsi Wikimedia kaudu