Erinevus phusioni ja Taq polümeraasi vahel

Peamine erinevus - Phusion vs Taq Polümeraas
 

DNA polümeraasid on molekulaarbioloogia tehnikates laialdaselt kasutatavad ensüümid ja esinevad looduslikult ka kõigis organismides, mis läbivad DNA replikatsiooni. Need on peamised polümeriseeruvad ensüümid, mis hõlmavad replikatsiooni. DNA polümeraas on võimeline lisama nukleotiide DNA ahela vabasse 3 'otsa, põhjustades sellega uue ahela pikenemist. Praegu on molekulaarbioloogia arengu tõttu haiguste diagnostikas ja tööstuslikes rakendustes oluline toota mitmesuguste kasulike omadustega polümeraase. See suurendab meetodi täpsust ja muudab selle kiiremaks tehnikaks. Phusion ja Taq polümeraas on kaks kaubanduslikult toodetud termostabiilset polümeraasi ensüümi, mida kasutatakse spetsiaalsetes molekulaarsetes rakendustes. Phusion on DNA polümeraas, mis on isoleeritud Pyrococcus furiosus ja seda kasutatakse peamiselt truuduse suurendamiseks kloonimiskatsetes. Taq DNA polümeraas on standardne DNA polümeraas, mida kasutatakse polümeraasi ahelreaktsioonis (PCR), ja see eraldatakse termostabiilsest bakterist; Thermus aquaticus. võtme erinevus kahe ensüümi vahel on lähte mikroorganism. Phusion isoleeritakse ekstremofiilist, Pyrococcus furiosus arvestades, et Taq polümeraas eraldatakse termofiilist, Thermus aquaticus.

SISU

1. Ülevaade ja peamised erinevused
2. Mis on tuumasüntees?
3. Mis on Taq polümeraas
4. Phusioni ja Taq-polümeraasi sarnasused
5. Kõrvuti võrdlus - tabelina esitatud Phusion vs Taq polümeraas
6. Kokkuvõte

Mis on Phusion?

Fusioon-DNA polümeraas on uudne polümeraas, mida toodetakse ensüümi isoleerimise teel Pyrococcus furiosus, mis on ekstremofiilne Archaea. Need mikroobid elavad äärmiselt kõrgetel temperatuuridel, muutes seeläbi polümeraasi väga kuumuskindlaks polümeraasiks. Fusioonpolümeraasi kasutatakse tavalise termostabiilse polümeraasi suhtes ülima täpsuse saavutamiseks; Taq polümeraas. Fusioonpolümeraas on võimeline amplifitseerima pikki matriitse kuni 7,5 kb genoomset DNA-d. Phusion-polümeraasi optimaalne polümerisatsioonivõime on 72 ° C⁰ C. Fusiooni kasutatakse kloonimistoodetes ka sekveneerimiseks, ekspressioonianalüüsiks ja mutatsioonide analüüsiks.

Fusioon-DNA polümeraasil on 3 '- 5' eksonukleaasi aktiivsus. See võimaldab pärast sünteesi värskelt sünteesitud ahela korrektuuri. Seega on nukleotiidide mittevastavused hõlpsasti parandatavad. Seega on selle veamäär väiksem. Phusion-polümeraasi üldised eelised on;

• Äärmine truudus
• Suur kiirus ja lühem pikendusaeg
• Tugevad reaktsioonid ja vajavad minimaalset optimeerimist
• Suur saagikus

Joonis 01: Fusioon

Phusion-polümeraasi peamine puudus on see, et see on pärsitud deoksüuridiintrifosfaadi (dUTP) juuresolekul. Kui dUTP-d kogunevad reaktsioonisegusse, võib see pärssida fusioonpolümeraasi toimeid. Seda hoitakse ära enne ensüümi lisamist, töödeldes reaktsioonisegu dUTPaasiga. Praegu kasutatakse selle probleemi leevendamiseks phusioonpolümeraasi asemel PUT Turbo nime all tuntud dUTP-vastupidavat varianti..

Mis on Taq polümeraas?

Taq DNA polümeraas Leiutis on muutnud molekulaarbioloogia valdkonda. See lahendas peamise probleemi DNA amplifikatsioonis. Taq DNA polümeraas on termofiilsest bakterist ekstraheeritud ja eraldatud kuumusstabiilne polümeraasi ensüüm, Thermus aquaticus. Selle ensüümi avastamine viib PCR-i väljaarendamiseni. See ensüüm on võimaldanud kasutada DNA amplifitseerimisel polümeraasi ahelreaktsiooni tavapärase vaevarikka kloonimismeetodi asemel. PCR-i kasutatakse nüüd molekulaardiagnostikas, põllumajanduses ja tööstuses, millele on tehnikale lisatud palju uusi variatsioone.

Joonis 02: Taq polümeraas

Taq DNA polümeraas toimib optimaalses temperatuurivahemikus 72 ° C⁰C - 80⁰C. Taq DNA polümeraas nõuab kaasfaktorit; magneesium oma funktsiooniks. Taq polümeraasil puudub 3 '- 5' korrektuurivõime, seetõttu on Taq DNA polümeraasi veamäär kõrgem võrreldes uuemat tüüpi DNA polümeraasidega, nagu näiteks fusioonpolümeraas jne. Kuid Taq DNA polümeraasi populaarsus on endiselt ensüümi mugavuse ja paindlikkuse tõttu on see kogu teadusmaailmas sama.

Millised on Phusioni ja Taqi polümeraasi sarnasused?

• Nii Phusion kui ka Taq polümeraasi ensüümid on polümeriseerivad ensüümid, mis on võimelised lisama nukleotiide DNA ahela 3'-vabale otsale.
• Nii Phusion kui ka Taq polümeraasid vajavad polümerisatsiooni alustamiseks praimerijärjestust.
• Nii Phusion kui ka Taq polümeraasid on soojapidavad.
• DNA amplifitseerimiseks kasutatakse PCR mehhanismides nii Phusion kui ka Taq polümeraase.
• Polümeraasi lisamisel reaktsioonisegule lisatakse ensüümi efektiivsuse tagamiseks nii Phusion kui ka Taq polümeraasid.
• Nii Phusion kui ka Taq polümeraasid sünteesitakse molekulaarbioloogia eksperimentaalsetel eesmärkidel.
• Nii Phusion kui ka Taq polümeraasid vajavad oma funktsiooni täitmiseks kofaktorit.

Mis vahe on fusioonil ja Taq-polümeraasil??

Phusion vs Taq polümeraas
Phusion on DNA polümeraas, mis on isoleeritud Pyrococcus furiosus ja seda kasutatakse peamiselt truuduse suurendamiseks kloonimiskatsetes.	Taq DNA polümeraas on standardne DNA polümeraas, mida kasutatakse polümeraasi ahelreaktsioonis (PCR), ja see eraldatakse termostabiilsest bakterist, Thermus aquaticus.
Allikaorganism
Fusioon ekstraheeritakse ekstremofiilsest arhaast - Pyrococcus furiosus.	Need kirjandusteosed ulatuvad koloniseerimisperioodist dekoloniseerimisperioodini.
Korrektuuri võime
3–5-korrektne lugemisvõime on Phusionil olemas.	Taq-polümeraasil puudub 3–5-korrektne lugemisvõime.
Truudus
Phusioniga on tegemist suure truudusega.	Taq polümeraas näitab vähest täpsust.
Amplifikatsioon
Phusion on võimeline võimendama pikki DNA fragmente.	Taq polümeraas on võimeline võimendama palju lühemaid DNA fragmente.
dUTP mürgistus
Tuumasünteesitoimingut pärsib akumuleerumise veider.	DUPT ei inhibeeri Taq polümeraasi.

Kokkuvõte - Phusion vs Taq polümeraas

Phusion ja Taq DNA polümeraas on kaks kuumuskindlat polümeraasi, mida kasutatakse PCR meetodites. Phusion on ekstremofiilist eraldatud polümeraas, Pyrococcus furiosus arvestades, et Taq on isoleeritud termostabiilsetest bakteritest Thermus aquaticus. Taq DNA polümeraasi avastamine viib PCR-i leiutiseni. Phusionil on Taqi ees mitmeid eeliseid, mis on teinud Phusionist parema võimaluse suure täpsusega DNA tootmiseks. Kuid Taq polümeraasi kasutatakse endiselt PCR-is standardse polümeraasi ensüümina. See on erinevus Phusioni ja Taqi polümeraasi vahel.

Viide:

1.Biolabs, Uus-Inglismaa. “Taq DNA polümeraasid.” New England Biolabs: Reagendid bioteaduste tööstusele. Saadaval siin  
2. “Fusioon-DNA polümeraas.” Uus-Inglismaa biolabs. Saadaval siin 

Pilt viisakalt:

1.'GAM illustreerinud Nivin Nasri'By NivinN - Oma töö, (CC BY-SA 4.0) Commonsi Wikimedia kaudu  
2.'Taq'By Adenosine - Oma töö, (CC BY-SA 3.0) Commonsi Wikimedia kaudu