Erinevus transformatsiooni ja transfektsiooni vahel

Ümberkujundamine vs transfektsioon
 

Transformatsioon ja transfektsioon on kaks lihtsat tehnikat, mida kasutatakse võõra geeni sisestamiseks peremeesrakku. Need tehnikad sõltuvad aga peremees- või vektorisüsteemide tüübist.

Mis on raku transformatsioon?

Transformatsioon on meetod, mida kasutatakse geenide sisestamiseks pärmi- ja bakterirakkudesse. See tehnika põhjustab tavaliselt geenide pärilikke muutusi ja seega on geeni ekspressioon püsiv. Bakterite muundamist tutvustas 1928. aastal esmakordselt Frederick Griffith. Siis kasutati seda tehnikat 1970. aastate alguses E. coli. GMO ümberkujundamise käigus E. coli, rakke leotatakse jääkülmas CaCl lahuses₂. See samm teeb E.coli rakud pädevad. Pärast seda segatakse pädevad rakud plasmiidi DNA-ga ja inkubeeritakse jääl 20-30 minutit. Seejärel antakse lühike kuumašokk, et võimaldada DNA ülekandmist rakku. Lõpuks pannakse rakud toitainepuljongisse ja inkubeeritakse plasmiidide saamiseks temperatuuril 37 ° C 60-90 minutit. Kui need etapid on edukalt lõpule viidud, saab transformeeritud rakud panna rakkude paljundamiseks sobivale söötmele. Kuna transformatsiooni peetakse ebatõhusaks tehnikaks, ei tohi seda kloonipankade valmistamiseks kasutada.

Mis on rakkude transfektsioon?

Transfektsioon on meetod võõra geeni sisestamiseks tavaliselt imetajarakkudesse. Transfektsioonimeetodeid on kaks; nimelt mööduv transfektsioon ja stabiilne transfektsioon. Mööduva transfektsiooni korral on geeniekspressioon saadaval piiratud aja jooksul; seega põhjustab geeni muutumine ajutist ekspressiooni. See transfektsioonimeetod on lihtne ja kiire; seetõttu saab seda rutiinselt kasutada. Mööduva transfektsiooni üheks puuduseks on raskused suuremahuliste valkude sünteesisüsteemide rakendamisel.

Stabiilse transfektsiooni ajal integreeritakse sihtmärkgeen peremeesraku genoomi ja seega on geeni ekspressioon püsiv, erinevalt mööduvast transfektsioonist.

Mis vahe on transformatsioonil ja transfektsioonil??

• Transformatsioon on geeni sisestamine prokarüootsesse rakku (bakteriaalsed ja pärmirakud), samas kui transfektsiooni nimetatakse geeni sisestamiseks imetajarakku.

• Transformatsiooni tulemuseks on geenide pärilik muutus, samas kui transfektsioon võib põhjustada geenide ajutise ekspressiooni või püsivaid muutusi.