Erinevus sooja ja külma trüpsiini vahel
Share
Peamine erinevus - soe vs Külm Trüpsiinimine
Soe ja külm trüpsiinimine on kaks meetodit, mida kasutatakse rakkude ensümaatiliseks lagundamiseks loomarakkude kasvatamisel. võtme erinevus sooja ja külma trüpsiinimise vahel, nagu nimed viitavad, sõltub temperatuur, mille juures trüpsiin lisatakse raku lagunemisel. Soe trüpsiinimine toimub kõrgematel temperatuuritingimustel (36,5-37 ° C) 0C) arvestades, et külm trüpsiinimine toimub madalal temperatuuril.
Loomarakkude primaarse kultiveerimise käigus kasutatakse kolme peamist meetodit, mis on osutunud edukaks. Need kolm meetodit hõlmavad rakkude mehaanilist lagundamist, rakkude ensümaatilist lagundamist ja primaarset eksplanteerimistehnikat. Rakkude ensümaatiline lagunemine, mis viib rakkude eraldamiseni, toimub valke lagundava ensüümi trüpsiini abil. Seetõttu nimetatakse seda protsessi trüpsiniseerimiseks. Trüpsiinimist saab läbi viia kahel erineval viisil, nimelt soojas trüpsiinimisel ja külmas trüpsiinimisel. Soe trüpsiinimine on meetod rakkude töötlemiseks trüpsiiniga soojades tingimustes temperatuuril 36,5-37 ° C 0C. Külm trüpsiinimine on trüpsiiniga töötlemise protsess, mis toimub külmemates tingimustes, eelistatavalt jääs, säilitades väga madalad temperatuurid.
SISU
1. Ülevaade ja peamised erinevused
2. Mis on soe trüpsinisatsioon
3. Mis on külm trüpsinisatsioon
4. Sooja ja külma trüpsiini sarnasused
5. Kõrvuti võrdlus - soe vs külm trüpsiinimine tabelina
6. Kokkuvõte
Mis on soe trüpsinisatsioon?
Trüpsiinimist saab teha rakuliste komponentide lagundamiseks, et eraldada rakud primaarse rakukultuuri tootmiseks. Trüpsiin on valkude lagundamise ensüüm ja trüpsiinimisel kasutatav ensüümide segu võib olla kas toorekstrakt või puhastatud toode. Tooriekstrakt on väidetavalt tõhusam valkude lüüsimisel ja rakkude lagunemisel, kuna see sisaldab muid lagundavaid ensüüme.
Soe trüpsiinimine on kõige sagedamini kasutatav ensümaatiline meetod rakkude lagundamiseks, mis toimub kõrgematel temperatuuridel. Enne trüpsiiniga töötlemist tükeldatakse soovitud kude väiksemateks tükkideks. See hõlbustab hõlpsat jaotust. Seejärel pestakse tükeldatud kude spetsiaalse söötmega, mida tuntakse põhisoola dissektsiooni keskkonnana.
Pärast pesemisetapi lõppu muundatakse rakud kolbi, mis sisaldab aktiivset ensüümi, mis on trüpsiin. Kuna see meetod eeldab sooja trüpsiniseerimisprotokolli, asetatakse trüpsiin temperatuurile umbes 37 ° C 0C umbes neli tundi.
Joonis 01: trüpsiin
Sisu segatakse ja segatakse tsentrifuugimismeetoditega, et hõlbustada protseduuri ja kiirendada lagunemisprotsessi. Kui soovitatud aeg on saavutatud, saab rakud supernatandist tuletada. Seejärel inkubeeritakse supernatandist saadud rakke kindlal temperatuuril ja kellaajal.
Mis on külm trüpsinisatsioon?
Külm trüpsiinimine on teist tüüpi trüpsiinimine, mis toimub külmas. Selle meetodi korral pannakse tükeldatud ja pestud rakud viaalidesse jääle ja seejärel leotatakse trüpsiiniga. Leotamise periood on palju pikem - umbes 6 - 24 tundi.
Pärast leotusprotseduuri lõppu eemaldatakse trüpsiin rakulüsaadist ja koetükke inkubeeritakse temperatuuril 37 ° C. 0C umbes 20-30 minutit. Rakkude lagunemine toimub koesegu korduva pipeteerimisega. See võimaldab rakkudel membraanist eralduda ja jõuda supernatanti. Kui rakud on supernatandis, inkubeeritakse ja kasvatatakse soovitud temperatuuril ja ajavahemikul.
Külma trüpsiinimise meetodil on mitmeid eeliseid
- Elujõuliste rakkude suurem saagis, kuna rakkude kahjustused on viidud miinimumini. Tsentrifuugimisetappide mittekasutamisel minimeeritakse rakkude kahjustused.
- Väga mugav meetod.
- Vähem töömahukas.
Külma trüpsiniseerimismeetodi peamine piirang on see, et suuri koguseid ei saa ühel juhul kasutada.
Millised on sooja ja külma trüpsiniseerimise sarnasused?
- Nii soojas kui ka külmas trüpsiinimisprotsessis kasutatakse rakkude lagundamiseks ensüümi trüpsiini.
- Rakkude kasvatamise protseduurides kasutatakse rakkude lagundamiseks nii sooja kui ka külma trüpsinisatsiooni protsesse.
- Nii sooja kui ka külma trüpsinisatsiooni raviprotseduurides saadakse rakud supernatandist.
Milline on erinevus sooja ja külma trüpsiniseerimise vahel?
Soe vs külm trüpsiniseerimine | |
| Soe trüpsiinimine on meetod rakkude töötlemiseks trüpsiiniga soojades tingimustes temperatuuril 36,5-37 ° C 0. | Külm trüpsiinimine on trüpsiiniga töötlemise protsess, mis toimub külmemates tingimustes, eelistatavalt jääs, hoides väga madalaid temperatuure. |
| Protokoll | |
| Tükeldatud koetükke hoitakse temperatuuril 37 ° C 0C pidevalt kogu protseduuri vältel. | Tükeldatud koetükke hoitakse algselt jääkülma temperatuuril ja seejärel temperatuuril 37 ° C 0. |
| Temperatuur | |
| Soe trüpsiinimine toimub temperatuuril 36,5-37 0 | Külm trüpsiinimine toimub jääkülma temperatuuril. |
| Aeg kulutatud | |
| Kogu sooja trüpsiini protsessi (umbes 4 tundi) jaoks on vaja vähem aega. | Külma trüpsiini saamiseks on vaja kauem aega (umbes 6 - 24 tundi). |
| Elujõuliste rakkude saagis | |
| Madal soojas trüpsiinisisaldus. | Kõrge külma trüpsinisatsioon. |
| Tsentrifuugimise kasutamine | |
| Tsentrifuugimine on vajalik rakkude lagunemiseks soojas trüpsiinimisel. | Tsentrifuugimine pole trüpsiini külmas teostamisel vajalik. |
| Algne koekogus trüpsiini jaoks | |
| Soojas trüpsiinimisel võib kasutada suuremat kogust kudet. | Külmas trüpsiinimisel võib kasutada väiksemat kogust kudet. |
| Rakkude kahjustus | |
| Tugeva tsentrifuugimise tõttu soojas trüpsiinis. | Vähem külma trüpsiini tõttu. |
Kokkuvõte - Soe vs Külm Trüpsiinimine
Trüpsiinimine on meetod, milles kasutatakse valke lagundavat ensüümi trüpsiini primaarsete rakukultuuride lagundamiseks ja ettevalmistamiseks raku kultiveerimise käigus. Protseduuri ajal kasutatud temperatuuridel põhinevatel trüpsinisatsioonil on kaks peamist tehnikat. Nad on sooja ja külma trüpsiiniga. Soe trüpsiinimine viiakse läbi temperatuuril 37 ° C 0C arvestades, et külm trüpsiinimine toimub jääkülmades tingimustes. Ehkki külma trüpsinisatsiooni valmimine võtab kauem aega, on väidetavalt see elujõuliste rakkude suurem saagis. See on tingitud asjaolust, et rakkude kahjustused minimeeritakse külma trüpsiini korral, kuna need ei kasuta intensiivseid tsentrifuugimisetappe. See on erinevus sooja ja külma trüpsiini vahel.
Viide:
1. “Trüpsiinimine”. Trüpsiinimine - ülevaade | ScienceDirexi teemad. Saadaval siin
2. “Esmane rakukultuur: 3 tehnikat (diagrammiga).” Bioloogiaalane arutelu, 16. oktoober 2015. Saadaval siin
Pilt viisakalt:
1.'Proovi aktiivset saiti'By Fdardel - Oma töö, (CC BY-SA 3.0) Commonsi Wikimedia kaudu
