Erinevus bensonaasi ja DNaasi vahel

Peamine erinevus - bensonaas vs DNaas
 

Nukleiinhapete lagunemine on oluline paljude molekulaarbioloogia meetodite jaoks. Seda kasutatakse laialdaselt rekombinantses DNA tehnoloogias, et vabaneda soovimatutest DNA ja RNA fragmentidest. Nukleiinhapet lagundavaid ensüüme nimetatakse nukleaasideks ja need võivad nõutavast funktsioonist lähtuvalt olla erinevat tüüpi. DNA-d lagundavaid nukleaase nimetatakse DNaasideks, kuid RNA-d lagundavaid nukleaase nimetatakse RNaasideks. Neid ensüüme kasutatakse enamasti in vitro katsed kus sisse in vitro puhta DNA, RNA või valkude eraldamiseks viiakse läbi molekulaarsed testid. Bensonaasid on teatud tüüpi nukleaasid, mis lagundavad nii DNA-d kui ka RNA-d, samas kui DNaasid lagundavad ainult DNA-d. See on bensonaasi ja DNaasi peamine erinevus.

SISU

1. Ülevaade ja peamised erinevused
2. Mis on bensonaas
3. Mis on DNase
4. Bensonaasi ja DNaasi sarnasused
5. Kõrvuti võrdlus - bensonaas vs DNaas tabelina
6. Kokkuvõte

Mis on benzonase?

Bensonaas on geneetiliselt muundatud endonukleaas firmalt Serratia marcescens. Seda ensüümi toodetakse E. coli võõrustajad tööstuslikus mastaabis. Bensonaas on võimeline lõhustama kaheahelalise DNA, lineaarse DNA, ringikujulise DNA ja üheahelalise RNA. Seega on bensonaas kaubanduslikult oluline. Bensonaasi ensüüm on valgu dimeer, millel on 245 identset aminohapet, ~ 30 kDa alaühikud, millel on kaks olulist disulfiidsidet. Bensonaas lõhustab nukleiinhappeid oma 5 'otsas ja tulemuseks on vabade 5'-otsadega fragmendid. Bensonaas võib lõhustada nukleiinhappeid mis tahes järjestuses, kuid eelistab GC-rikkaid piirkondi.

Bensonaasi hoitakse temperatuuril -20 ° C ⁰C. Ensüümi aktiivsuse optimaalne pH on 8,0–9,2. Bensonaasi rakendused hõlmavad proovi ettevalmistamist valgu 2D geelelektroforeesiks, mille käigus bensonaas eemaldab seotud nukleiinhapped ja nukleiinhapete saasteainete eemaldamise rekombinantsetest valgupreparaatidest. Seda kasutatakse ka valguekstraktide viskoossuse vähendamiseks ja rakkude kogunemise vältimiseks rakusegus.

Mis on DNase?

DNaas on nukleaas, hüdrolüütiline ensüüm, mis on võimeline lõikama ainult kaheahelalist DNA-d. DNaase on kahte peamist tüüpi: DNase I ja DNase II. DNaas I osaleb kaheahelalise DNA lõhustamisel, saades 5 'vabade otstega polünukleotiide. DNaas II osaleb kaheahelalise DNA lõhustamises, saades 3 'vabade otstega või üleulatuvate polünukleotiidide ahelad.

DNaas I

DNase I funktsioneerib optimaalsel pH tasemel 7,0 - 8,0. Ensüümi aktiivsus sõltub paljudest ioonsetest kofaktoritest, mille hulka kuulub Ca²⁺, Mg²⁺ või Mn²⁺. Mg tegevus²⁺ ja Mn²⁺ otsustab DNaasi I funktsiooni. Mg juuresolekul²⁺, DNaas I lõikab dsDNA iga ahela iseseisvalt. See toimub juhuslikult. Seevastu Mn juuresolekul^2+, ensüüm lõikab mõlemad DNA ahelad umbes samas kohas. Selle lõhestamise tulemuseks on kahte tüüpi DNA fragmentide tootmine; üks nüri otstega tüüp ja teine ​​ühe või kahe nukleotiidi üleulatuva tüübiga.

Joonis 02: DNaas

DNaas II

DNase II funktsioneerib optimaalsel pH tasemel 4,5–5,0 ja selle aktiivsuseks on vajalikud kahevalentsed metalliioonid, sarnaselt DNase I-ga. DNase II mehhanism koosneb teadaolevalt kolmest põhietapist..

1. DNA karkassis indutseeritakse mitu ühe ahela katkemist.
2. Tekivad happes lahustuvad nukleotiidid ja oligonukleotiidid.
3. Mittelineaarne hüperkromaatiline nihe toimub viimases faasis.

DNaasi ensüümi peamised inhibiitorid hõlmavad metalli kelaate, siirdemetalle ja kemikaale nagu naatriumdodetsüülsulfaat ja β-merkaptoetanool..

DNaasi peamised rakendused hõlmavad DNA-vaba RNA ekstraktide ja valguekstraktide valmistamist ning matriits-DNA eemaldamist in vitro transkriptsioonikatsete käigus.

Millised on bensonaasi ja DNaasi sarnasused?

• Mõlemad on hüdrolüütilised ensüümid.
• Mõlemad on nukleaasid.
• Mõlemad osalevad lõhustades nukleiinhapete fosfodiestersidemeid.
• Mõlemad vajavad ensüümi aktiivsuse säilitamiseks optimaalset pH-d ja säilitustemperatuuri.
• Ensüümide inhibiitorid hõlmavad kelaativaid aineid, siirdemetalle ja detergente.
• Rakendused keskenduvad peamiselt DNA, RNA ja valkude kõrge puhtusastmega ekstraktide saamisele.
• Mõlemat ensüümi saab toota geenitehnoloogia abil.

Mis vahe on bensonaasi ja DNaasi vahel?

Bensonaas vs DNaas
Bensonaas on ensüüm, mis on võimeline lõhustama kaheahelalist DNA-d, lineaarset DNA-d, ringikujulist DNA-d ja RNA-d.	DNaas on ensüüm, mis on võimeline lõhestama kaheahelalist DNA-d.
Ensüümi substraat
Nii DNA kui ka RNA on bensonaasi substraadid.	DNA on DNaasi substraat.
Struktuur
Bensonaasi optimaalne pH on 7,0-8,0	DNaasi I optimaalsed pH vahemikud on 7,0 - 8,0 ja DNaas II on 4,5 - 5,0.

Kokkuvõte - benzonase vs DNase

Nukleaasensüüme kasutatakse laialdaselt erinevates eksperimentaalsetes protseduurides seoses molekulaarbioloogia ja geenitehnoloogiaga. Bensonaas ja DNaas on kahte tüüpi nukleaase. Bensonaas osaleb nii DNA kui ka RNA lagundamises, samas kui DNaas osaleb kaheahelalise DNA lõhustamises. See on bensonaasi ja DNaasi põhiline erinevus. Praegu toodetakse mõlemat nukleaasitüüpi rekombinantse DNA tehnoloogia abil, mis annab kõrgema kvaliteediga ensüüme, mis on optimeeritud maksimaalseks tootmiseks.

Laadige alla Benzonase vs DNase PDF-i versioon

Selle artikli PDF-versiooni saate alla laadida ja seda võrguühenduseta otstarbel kasutada tsitaatide märkuse kohaselt. Laadige alla PDF-versioon siit. Bensoonase ja DNase'i erinevus

Viited:

1. “Deoksüribonukleaas I veise kõhunäärmest D5025.” Sigma-Aldrich, saadaval siit. Juurdepääs 19. septembril 2017.
2. “Deoksüribonukleaas II”. Deoksüribonukleaas II - Worthingtoni ensüümi käsiraamat, saadaval siit. Juurdepääs 19. septembril 2017.

Pilt viisakalt:

1. „DNAse ülitundlik sait”: autorid Wang Y-M, Zhou P, Wang L-Y, Li Z-H, Zhang Y-N jt. - Wang Y-M, Zhou P, Wang L-Y, Li Z-H, Zhang Y-N jt. (2012) Seos DNase I ülitundliku saidi jaotuse ja geeniekspressiooni vahel HeLa S3 rakkudes. PLOS ONE 7 (8): e42414. doi: 10.1371 / journal.pone.0042414 (CC BY-SA 2.5) Commonsi Wikimedia kaudu