Erinevus otsese ja kaudse ELISA vahel

Peamine erinevus - otsene vs kaudne ELISA
 

Ensüümidega seotud immuunanalüüs (ELISA), tuntud ka kui ensüümi immuunanalüüs, on seroloogiline test, mis tuvastab veres antikehad. Seda kasutatakse diagnostilise vahendina, et välja selgitada, kas patsient on kokku puutunud teatud tüüpi viiruse või mõne muu nakkusetekitajaga (antigeeniga) ja kas keha on tootnud nakkuse vastu antikehi. ELISA abil saab tuvastada ka varasemad ja praegused nakkused. Seetõttu kasutavad arstid ELISAt sageli enne haiguste põhjalikku analüüsi eelkontrolli testina. Seda testi saab teha laboris, võttes patsiendilt vereproovi. ELISA testi on kahte tüüpi: otsene ELISA ja kaudne ELISA test. Peamine erinevus otsese ja kaudse ELISA vahel on see kaudne ELISA on tundlikum ja nõuab sekundaarse antikeha lisamist samas otsene ELISA on vähem tundlik ja kasutab ainult primaarset antikeha.

SISU
1. Ülevaade ja peamised erinevused
2. Mis on otsene ELISA
3. Mis on kaudne ELISA
4. Kõrvuti võrdlus - otsene ja kaudne ELISA
5. Kokkuvõte

Mis on otsene ELISA?

ELISA on haiguse diagnostiline test, mida tehakse teatud antigeenide või antikehade esinemise tuvastamiseks veres. Seda tehakse plaadianalüüsina. See kasutab antikehi, mis on seotud hõlpsasti määratavate ensüümidega. Antigeenide olemasolu seerumiproovis seostub ensüümidega seotud spetsiifiliste antikehadega. Viimases etapis lisatakse spetsiifiline substraat, et reageerida ensüümiga. Ensüüm muudab substraadi värviliseks või signaali tekitavaks tooteks. Keemilise substraadi värvimuutus näitab konkreetse antikeha olemasolu seerumiproovis. Otsene ELISA test kasutab ainult ensüümiga seotud primaarset antikeha. Antigeeniga seondumisel muudab see kiiresti värvi, mis näitab nakkusetekitaja olemasolu veres. Otsesel ELISA-l on signaalide intensiivsus siiski nõrgem, kuna epitoobid piirduvad antigeenide sidumisega. Seega on otsene ELISA vähem tundlik kui kaudne ELISA.

Joonis 01: otsene ELISA test

Mis on kaudne ELISA?

ELISA võib läbi viia, kasutades kahte tüüpi antikehi, nimelt; primaarne antikeha ja sekundaarne antikeha. Kaudne ELISA-tööriist kasutab mõlemat tüüpi antikehi signaalide paremaks tuvastamiseks võimendamiseks. Kaudne ELISA meetod viiakse läbi järgmiselt.

1. Plaate inkubeeritakse antigeenidega ja pestakse mittespetsiifilise seondumise blokeerimiseks.
2. Seejärel lisatakse primaarsed antikehad ja pestakse.
3. Lisatakse ensüümiga seotud sekundaarne antikeha ja pestakse.
4. Lisatakse substraat ja lastakse reageerida ensüümidega.
5. Signaalid tuvastatakse ja tuvastatakse spetsiifilise antigeeni olemasolu või puudumine proovis.

Kaudses ELISA testis võivad mitu primaarset antikeha seostuda ühe primaarse antikehaga. Sekundaarsed antikehad on seotud hõlpsasti määratavate ensüümidega. Seetõttu võib üks sidumine anda tugeva signaali rohkem kui ühe interaktsiooni tõttu. Seega on kaudne ELISA tundlikum kui otsene ELISA. Kuid kaudne ELISA võib sekundaarsete antikehade ristreaktsioonide tõttu anda mittespetsiifilisi signaale.

Joonis 02: kaudne ELISA test

Mis vahe on otsesel ja kaudsel ELISA-l??

Otsene vs kaudne ELISA
Otsene ELISA on kaudse ELISAga võrreldes vähem tundlik.	Kaudne ELISA on tundlikum.
Aeg kulunud
Otsene ELISA-test on kiire protsess.	Kaudne ELISA on aeganõudev.
Antikehade kasutamine
Otseses ELISA-s kasutatakse ainult ühte tüüpi antikehi (primaarseid antikehi).	Primaarseid ja sekundaarseid antikehi kasutatakse kaudseks ELISA-ks.
Seos ensüümidega
Primaarsed antikehad on seotud ensüümidega.	Sekundaarsed antikehad on seotud ensüümidega.
Teiste antikehade ristreaktiivsus
Otsene ELISA kõrvaldab teiste antikehade ristreaktiivsuse.	Teiste antikehade ristreaktiivsus mõjutab kaudset ELISA-d.
Signaalid
Signaalid on kaudse ELISA-ga võrreldes nõrgad.	Signaale võimendatakse kaudses ELISA-s. Seega on seda lihtne tuvastada.

Kokkuvõte - otsene vs kaudne ELISA

ELISA on biokeemiline tehnika, mida kasutatakse peamiselt immunoloogias antikeha või antigeeni olemasolu tuvastamiseks patsiendi vereproovis. Seda saab läbi viia kahel protsessil, mida nimetatakse otseseks või kaudseks ELISA-ks. Otsene ELISA test kasutab antigeeni tuvastamiseks ainult primaarseid antikehi, kaudne ELISA kasutab nii primaarseid kui ka sekundaarseid antikehi. Otsese ELISA korral märgistatakse primaarsed antikehad, kaudse ELISA korral aga sekundaarsed antikehad. See on erinevus otsese ja kaudse ELISA vahel.

Viited
1. ”Ensüümiga seotud immunosorbentanalüüs (ELISA).” Maailma Terviseorganisatsiooni bülletään. USA Riiklik Meditsiiniraamatukogu, 1976. Veeb. 29. märts 2017
2. Loon, A. M van, J. T Van Der Logt, F. W. Heessen ja J. Van Der Veen. “Ensüümiga seotud immunosorbentanalüüs, mis kasutab märgistatud antigeeni immunoploos M ja A antikehade tuvastamiseks toksoplasmoosis: võrdlus kaudse immunofluorestsentsi ja kahekordse kihilise ensüümiga seotud immunosorbenttestiga.” Journal of Clinical Microbiology. USA Riiklik Meditsiiniraamatukogu, juuni 1983. Veeb. 29. märts 2017

Pilt viisakalt:
1. Cavitri “ELISA diagramm” - Omad tööd (CC BY 3.0) Commonsi Wikimedia kaudu 
2. Cawangi kaudne ELISA - Commons Wikimedia kaudu oma töö (CC0)