Immunofluorestsentsi ja immunohistokeemia erinevus

Peamine erinevus - immunofluorestsents vs immunohistokeemia
 

Haiguste diagnostika, milles kasutatakse molekulaarbioloogilisi meetodeid, on muutunud kliinilise laboratooriumi tehnoloogia uueks valdkonnaks. See hõlmab kõiki katseid ja meetodeid haiguse tuvastamiseks ja haiguse põhjuse mõistmiseks, analüüsides organismis DNA, RNA või ekspresseeritud valke. Kiire areng molekulaardiagnostikas on võimaldanud nakkushaiguste ja mittenakkuslike haiguste alusuuringuid. Neid kasutatakse järjestuses või ekspressioonitasemes toimuvate muutuste määramiseks haigusega seotud geenides või valkudes. Immunofluorestsents (IF) ja immunohistokeemia (IHC) on kaks sellist vähibioloogias laialdaselt kasutatavat tehnikat. IF on IHC tüüp, kus monoklonaalsete ja polüklonaalsete antikehade analüüsimiseks kasutatakse fluorestsentsi tuvastamise meetodit, samas kui IHC kasutab monoklonaalsete ja polüklonaalsete antikehade tuvastamiseks keemilisi meetodeid. See on peamine erinevus IF ja IHC vahel.

SISU

1. Ülevaade ja peamised erinevused
2. Mis on immunofluorestsents 
3. Mis on immunohistokeemia
4. Immunofluorestsentsi ja immunohistokeemia sarnasused
5. Kõrvuti võrdlus - immunofluorestsents vs immunohistokeemia tabelina
6. Kokkuvõte

Mis on immunofluorestsents (IF)?

Immunofluorestsents on detekteerimistehnika, kus testis kasutatud antikehad märgistatakse, kasutades detekteerimise eesmärgil fluorestsentsvärve või fluorestsentsvalke. Märgistatud sekundaarsed antikehad võivad põhjustada soovimatuid taustsignaale; seetõttu põhineb IF-tehnika esmase antikeha enda märgistamisel praegu, et vältida soovimatuid signaale tuvastamise ajal. Selle tehnika abil välditakse primaarse ja sekundaarse antikeha vahel mittespetsiifilist seondumist ja see on kiirem, kuna sekundaarset inkubeerimisetappi pole. Parandatakse ka andmete kvaliteeti.

Joonis 01: Topelt immunofluorestsentsvärvimine BrdU, NeuN ja GFAP jaoks

Fluorokroomid või fluorestsentsvärvid on ühendid, mis võivad absorbeerida kiirgust, eelistatavalt ergastatud ultraviolettkiirgust. Kui osakesed jõuavad ergastatud olekust põhiasendisse, eraldavad nad kiirgust, mille spektri moodustamiseks detektor hõivab ja tuvastab. On väga oluline, et fluorestsentsmärgis oleks konkreetse reaktsiooni jaoks sobiv ja stabiilne ning täpsete tulemuste saamiseks tuleks see antikehaga korralikult konjugeerida. Üks enimkasutatavaid fluorokroome on fluorestseiinisotiotsüanaat (FITC), mis on rohelist värvi, neeldumis- ja emissiooni tipplainepikkused on vastavalt 490 nm ja 520 nm. Veel üks IF-s kasutatav rodamiin on punase värvusega ning selgesti eristatavad neeldumis- ja emissioonipiikide lainepikkused on 553 nm ja 627 nm..

Mis on immunohistokeemia (IHC)?

IHC on molekulaarse testimise meetod, mida kasutatakse antigeeni olemasolu tuvastamiseks ja kinnitamiseks sihtrakus. Sihtrakkudeks võib olla nakkav osake, mikroobne patogeen või pahaloomuline kasvajarakk. IHC kasutab sihtrakkude rakupinnal esinevate antigeenide olemasolu kindlakstegemiseks monoklonaalseid ja polüklonaalseid antikehi. Meetod põhineb antigeeni ja antikeha sidumisel. Konkreetse antigeeni olemasolu või puudumise tuvastamiseks konjugeeritakse nende antikehadega detekteerimismarker. Need markerid võivad olla keemilised markerid nagu ensüümid, fluorestsentsmärgistatud antikehad või radiomärgistatud antikehad.

Joonis 02: immunohistokeemiaga värvitud hiire-aju viil

IHC populaarseim rakendus vähirakkude bioloogias on pahaloomuliste kasvajate tuvastamiseks, kuid seda kasutatakse ka nakkushaiguste tuvastamiseks.

Millised on immunofluorestsentsi ja immunohistokeemia sarnasused?

• Immunofluorestsents ja immunohistokeemia toimuvad in vitro tingimustes.
• Mõlemad tehnikad põhinevad antigeeni antikehal
• Mõlemad on väga kiired tehnikad.
• Meetodite tulemused on korratavad.
• Mõlemad on parandanud andmete kvaliteeti.
• Neid tehnikaid kasutatakse vähi ja nakkushaiguste diagnostikas.

Milline on erinevus immunofluorestsentsi ja immunohistokeemia vahel?

Immunofluorestsents vs immunohistokeemia
IF on detekteerimistehnika, mille puhul testis kasutatud antikehad märgistatakse, kasutades tuvastamiseks fluorestsentsvärve või fluorestsentsvalke.	IHC on detekteerimistehnika, mille puhul katses kasutatavad antikehad märgistatakse, kasutades tuvastamiseks kemikaale või radioaktiivseid elemente.
Täpsus
Täpsus on IF-tehnikas suurem kui IHC-l.	Täpsus on IHC-s madalam.
Spetsiifilisus
IF on täpsem.	IHC on vähem spetsiifiline.

Kokkuvõte - immunofluorestsents vs immunohistokeemia

Molekulaarsed mehhanismid on meditsiini valdkonnas toonud kaasa palju muutusi, tuues kaasa arenenud molekulaarse testimise meetodid, mis on diagnostika valdkonnas põhjustanud pöördeid. Need leiutised on viinud haiguse kiire ja täpse tuvastamise ja kinnitamiseni, võimaldades sellega ravimite edukat manustamist ja tootmist. Neid tehnikaid kasutatakse ka farmakoloogias ravimite sihtmärkide leidmiseks ja ravimi farmakokineetiliste omaduste kinnitamiseks ravimite metabolismi ajal. IF ja IHC on kaks diagnostilist meetodit, mis põhinevad antigeeni ja antikeha sidumise kontseptsioonil, ehkki tuvastamisviis erineb mõlemas meetodis. IF kasutab antigeeni tuvastamiseks fluorestsentsi põhimõtet ja IHC kasutab antigeeni tuvastamiseks keemilise konjugatsiooni kontseptsiooni. See on erinevus IF ja IHC vahel.

Laadige alla immunofluorestsentsi ja immunohistokeemia PDF-i versioon

Selle artikli PDF-versiooni saate alla laadida ja seda võrguühenduseta otstarbel kasutada tsitaatide märkuse kohaselt. Laadige alla PDF-versioon siit. Immunofluorestsentsi ja immunohistokeemia erinevus.

Viited:

1. Aoki, Valéria jt. "Otsene ja kaudne immunofluorestsents." Anais Brasileiros de Dermatologia, SociedadeBrasileira de Dermatologia, saadaval siin. Juurdepääs 25. augustil 2017.
2. Duraiyan, Jeyapradha jt. "Immunohistokeemia rakendused." Ajakiri Pharmacy & Bioallied Sciences, Medknow Publications & Media Pvt Ltd, august 2012, saadaval siin. Juurdepääs 25. augustil 2017.

Pilt viisakalt:

1. „Topelt immunofluorestsentsvärvimine BrdU, NeuN ja GFAP jaoks” autorid Ma M, Ma Y, Yi X, Guo R, Zhu W, Fan X, Xu G, Frey WH 2nd, Liu X. - Transformeeruva kasvufaktori intranasaalne kohaletoimetamine - beeta1 hiirtel pärast insulti vähendab infarkti mahtu ja suurendab neurogeneesi subventrikulaarses tsoonis; PMID 19077183 (CC BY 2.0) Commonsi Wikimedia kaudu
2. ABC-immunohistokeemiaga värvitud hiirekoe hüpotalamus. Autor: zabbn - Oma töö (CC BY-SA 3.0) Commonsi Wikimedia kaudu