Erinevus nitrotselluloosi ja nailonmembraani vahel

Peamine erinevus - nitrotselluloos vs nailonmembraan
 

Blotimine on oluline meetod DNA, RNA ja nende segude valkude spetsiifiliste järjestuste tuvastamiseks molekulaarbioloogias. Selleks kasutatakse membraani, mida nimetatakse blotiks. Seal on erinevaid blotimismeetodeid, näiteks põhja-, lõuna- ja läänemeetod. Blotimisprotsessi jaoks sobiva membraani valimine tuleb hoolikalt läbi viia, et vältida mittespetsiifilist seondumist ja valesid tuvastamisi. Nitrotselluloosi, nailonit ja PVDF-i kasutatakse blotimismeetodites tavaliselt membraanidena. Neil on erinevad omadused. Peamine erinevus nitrotselluloosi ja nailonmembraani vahel on selles nitrotselluloosmembraanidel on kõrge valkude immobiliseerimispotentsiaal arvestades, et nailonmembraanidel on kõrge nukleiinhappe immobiliseerimispotentsiaal. Kuid blotimismeetodites kasutatakse sageli mõlemat tüüpi membraane.

SISU
1. Ülevaade ja peamised erinevused
2. Mis on nitrotselluloosmembraan
3. Mis on nailonmembraan
4. Kõrvuti võrdlus - nitrotselluloos vs nailonmembraan
5. Kokkuvõte

Mis on nitrotselluloosmembraan?

Nitrotselluloosmembraan on nukleiinhapete ja valkude blotimismeetodites sagedamini kasutatav membraanfilter. Sellel on kõrge valkudega seondumise potentsiaal. Seetõttu kasutatakse nitrotselluloosmembraane laialdaselt lääne blotimise meetodis. Nitrotselluloosmembraanid ühilduvad kõigi hübridiseerimistehnikatega ja neil on parim seondumisvõime ilma häireteta. Nitrotselluloosi membraanid on looduslikult hüdrofiilsed. Nad loovad hüdrofiilset interaktsiooni molekulidega ja immobiliseerivad need tõhusalt membraanile. Kaubanduslikud nitrotselluloosmembraanid on saadaval kahes poorisuuruses: 0,45 ja 0,2 um.

Joonis 01: Western blot-meetodil kasutatud nitrotselluloosmembraan

Mis on nailonmembraan?

Nailonmembraan on veel üks kaubandusliku membraani tüüp, mida kasutatakse blotimismeetodites. Alternatiivina kasutatakse seda koos nitrotselluloosmembraanidega lõuna- ja põhjaosa blottide jaoks. Nailonmembraanid sobivad ideaalselt lõunapoolseks blotimiseks kui nitrotselluloos, kuna neil on kõrge afiinsus DNA-ga seondumiseks. Nailmembraanide mitmete ainulaadsete omaduste tõttu kasutavad teadlased nitrotselluloosmembraani asemel tavaliselt lõuna- ja põhjaosa blottide jaoks nailonmembraane. Erinevalt nitrotselluloosist soovitatakse ka nailonmembraane koorimiseks ja taasrebimiseks.

Joonis 02: Lõuna blotimiseks kasutatud nailonmembraan

Mis vahe on nitrotselluloosil ja nailonmembraanil??

Nitrotselluloos vs nailonmembraan
Nitrotselluloosi membraanid on haprad.	Nailonmembraanid on vähem haprad.
Käitlemine
Neid on keeruline käsitseda.	Neid on lihtne käsitseda.
Uuendamine
Toetamata nitrotselluloosmembraane on raske ümber kujundada.	Nailonmembraanidega on reprodutseerimine lihtne.
Ühilduvus erinevate säilitustingimustega
Nitrotselluloosmembraanid on vähem vastupidavad erinevatele säilitustingimustele.	Nailonmembraanid reageerivad erinevatele säilitustingimustele vastupidavamalt.
Kasutage
Vajalik on eelnevat niisutamist.	Nailmembraanide puhul pole eelnevat niisutamist vaja.
Hüdrofiilne loodus
Nitrotselluloosmembraanid on hüdrofiilsed, kuid vähem hüdrofiilsed kui nailonmembraanid.	Need on olemuselt väga hüdrofiilsed.
Immobilisatsiooni potentsiaal
Nitrotselluloosmembraanidel on väiksem afiinsus nukleiinhapete suhtes. Kuid sellel on kõrge afiinsus valkude suhtes.	Nailonmembraanidel on kõrge seondumisvõimalus nukleiinhapetega kui nitrotselluloosmembraanidel.

Kokkuvõte - nitrotselluloos vs nailonmembraan

Nitrotselluloos- ja nailonmembraanid on spetsiaalsed lehed, mida kasutatakse blotimismeetodil, et paljastada geelil olev riba. Need võimaldavad detekteerida segudest spetsiifilise järjestuse või valgu, immobiliseerides need membraanile. Kui molekulid on membraanile immobiliseeritud, saab seda kasutada märgistatud proovidega hübridisatsiooni analüüsi substraadina. Nitrotselluloosmembraani kasutatakse tavaliselt valkude tuvastamiseks Western blot meetodil, kuna sellel on kõrge seondumisafiinsus valkudega. Lõuna- ja põhja blotimiseks kasutatakse sageli nailonmembraane. See on erinevus nitrotselluloosi ja nailonmembraani vahel.

Viited:
1. Hayes, P. C., C. R. Wolf ja J. D. Hayes. "Blotimismeetodid DNA, RNA ja valkude uurimiseks." BMJ: Briti meditsiiniajakiri. USA Riiklik Meditsiiniraamatukogu, 14. oktoober 1989. Veeb. 07. aprill 2017
2. Mahmood, Tahrin ja Ping-Chang Yang. "Western Blot: tehnika, teooria ja tõrkeotsing." Põhja-Ameerika meditsiiniteaduste ajakiri. Medknow Publications & Media Pvt Ltd, september 2012. Veeb. 07. aprill 2017

Pilt viisakalt:
1. „Western blot transfer“ - Bensaccount inglise Vikipeedias (CC BY 3.0) Commonsi Wikimedia kaudu