Erinevus RT-PCR ja QPCR vahel

Pöördtranskriptsiooni polümeraasi ahelreaktsioon (RT-PCR)

RT-PCR vs QPCR

Biotehnoloogia areng on avastanud mitmeid viise, kuidas tulla toime elundisiirdamise nõudmistega aastate jooksul. Enne seda võis isik, kes annetaks abivajavale patsiendile vabatahtlikult ükskõik millise organi pärast surma, alustada siirdamise operatsiooni. Bioloogide pidevad uuringud ja uurimistöö viivad tüvirakkude avastamiseni.

Tüvirakud tähistavad neid, mis võetakse embrüo DNA-st, mis toimib nende rakkude regenereerimise allikana, mis põhimõtteliselt oleks elundi kloon, kust DNA on saadud. Kui inimõiguste aktivistid lobisevad selliste protseduuride peatamiseks, on edukad operatsioonid tõestanud tüvirakkude arengu tõhusust elundisiirdamisel.

Enne kui tüvirakke hinnata ja nendest täielikult aru saada, tuleb siiski tutvuda selle teadusliku avastusega seotud erinevate terminoloogiatega. Tüvirakkude kasvatamine tegeleb DNA ja selle kodeerimisega. Seega on üliõpilastel või kõigil valdkonnast huvitatud isikutel eluline eristada RT-PCR ja qPCR.

Pöördtranskriptsiooni polümeraasi ahelreaktsioon (RT-PCR) on üks paljudest polümeraasi ahelreaktsioonide variantidest ehk PCR. Seda laboratoorset tehnikat kasutatakse laialdaselt molekulaarbioloogias selleks, et teadlased tooksid amplifikatsioonina välja kindla DNA järjestuse mitu koopiat. Erinevus RT-PCR ja traditsioonilise PCR vahel on see, et RNA transkribeeritakse esmalt pöördvõrdeliselt selle DNA komplemendi, mis kasutab pöördtranskriptaasi. Pöördtranskriptsiooni sisaldav uus täiendav DNA amplifitseeritakse siis traditsioonilise PCR või reaalajas PCR abil.

Enamik seda protsessi õppivaid õpilasi teeb sageli vea, vahetades pöördtranskriptsiooni PCR-i ja reaalajas PCR-i, kuna neid kahte lühendatakse sarnaselt. Segaduse vältimiseks märgivad bioloogid reaalajas PCR-i kvantitatiivse reaalajas PCR-na või qPCR-na.

QPCR erineb suuresti RT-PCR-ist, kuna qPCR vastutab amplifikatsiooni mõõtmise eest selle toimumise ajal. Võib öelda, et RT-PCR alustab amplifikatsiooni, qPCR aga mõõdab seda protseduuri toimumise ajal.

Kvantitatiivne reaalajas PCR

QPCR on tegelikult muutnud traditsioonilist ühesuunalist lähenemisviisi, kui asi puudutab DNA ja RNA kvantifitseerimist, kuna qPCR meetodi rakendamine võimaldab bioloogidel määrata tuumahappe algkontsentratsiooni juba enne reaktsiooni tulemuste jälgimist ja kirja pandud.

QPCRi kasutamist, mida praegu peetakse geneetiliste uuringute kõige võimsamaks ja tundlikumaks analüüsimeetodiks, on märkimisväärselt laienenud. Praegu osaleb ta kvantitatiivses geeniekspressiooni analüüsis, genotüüpide määramises, patogeeni tuvastamises ja SNP analüüsis koos RNA interferentsi mõõtmisega.

Vaadeldud ja katsetatud kudede rakkudes esineva Messenger RNA ja MicroRNA kvantifitseerimiseks ühendatakse QPCR sageli pöördtranskriptsiooniprotsessiga. See annab siis veel ühe nähtava erinevuse nende kahe vahel: RT-PCR-i saab kasutada amplifikatsiooniprotsessis, kuid kvantitatiivse määramise jaoks tuleb see sulatada qPCR-ga.

QPCR on teadaolevalt ka kvantitatiivsem, kuna andmeid saab koguda PCR eksponentsiaalse kasvu (log) faasi edenedes. Bioloogid märgivad, et PCR-i kõrvalsaaduse kogus on otseselt võrdeline matriits-nukleiinhappe kogusega, mida mõõdetakse qPCR-iga.

Teisest küljest pole RT-PCR kaugeltki kvantitatiivne, kuna amplifitseeritud riba intensiivsuse jälgimine geelil, järgides kontsentratsioonistandardit, võib põhjustada "poolkvantitatiivseid" järeldusi.

Kokkuvõte:

1.QPCR ja RT-PCR on mõlemad terminid, mida kasutatakse biotehnoloogias ja mida kasutatakse DNA mitme koopia tootmiseks.
2.RT-PCR kasutatakse DNA koodi pöördtranskriptsiooni amplifitseerimiseks; QPCR mõõdab võimendamist.
3.RT-PCR on amplifikatsiooniks, qPCR aga kvantitatiivseks määramiseks.
4.QPCR on oma olemuselt kvantitatiivne, RT-PCR aga mitte.