SDS PAGE ja geelelektroforeesi erinevus

SDS PAGE vs geelelektroforees

Objekti massi kindlakstegemiseks tavaliselt valgu ja desoksüribonukleiinhappe (DNA) jaoks saab kasutada elektroforeesi. Kemikaalidesse viidud DNA ahel võib teabeprotsessi kiirendada või aeglustada. Kui elektroforees on lõppenud, liikuvate objektide suuruse lähendamiseks kasutatakse teadaoleva massi DNA markereid. Elektroforees on molekulaarbioloogide ja biokeemikute jaoks kõige sagedamini kasutatav vahend.

Selles protsessis kasutatakse tavaliselt kahte tüüpi elektroforeesi. Nendeks on naatriumdodetsüülsulfaat polüakrüülamiidi geelelektroforees (SDS-PAGE) ja natiivne geelelektroforees.

SDS-PAGE on geelelektroforeesi mitteselektiivne meetod, mida kasutatakse sellistes valdkondades nagu biokeemia, kriminalistika, bioloogia ja geneetika, et eraldada valku nende elektroforeetilisest liikuvusest. SDS on anioonne pindaktiivne aine, mida saab kasutada rakkude lüüsimisel DNA ekstraheerimise ajal ja valkude eraldamiseks SDS-PAGE-s. Elektroforeesi käigus vedeldatakse valgu segu esmalt SDS lahuses. Seejärel kantakse disulfiidsidemete eemaldamiseks merkaptoeetanool nimega aine, et muuta valk lineaarseks. Seejärel käivitatakse elektroforees. Tulemused annaksid kaks molekuli jääki, millest üks on SDS-PAGE.

SDS-PAGE puudumine pole probleem, kuna geelelektroforeesi saab siiski teha ainult siis, kui valgud ei kaota kogu oma sekundaarset ja tertsiaarset struktuuri ega avane üldiselt sirgeteks vardadeks.

Samal ajal kasutab natiivne geelelektroforees geeli krambivastase söötmena. Tavaliselt kasutatakse seda bioloogiliste makromolekulide, näiteks DNA, ribonukleiinhappe (RNA) ja valgu eraldamiseks. Seda saab kasutada ka nanoosakeste eraldamiseks.

Natiivses geelelektroforeesis kasutatakse kahte peamist geeli, nimelt:

Agaroosgeel, mida kasutatakse suuremate molekulide jaoks. See geel ei tuvasta väikesi erinevusi kahe molekulaarse riba vahel. Seda kasutatakse ka ainult DNA eraldamiseks. Agaroosgeeli visualiseerimine toimub etiidiumbromiidi seguga.

Polüakrüülamiidi geel, mida kasutatakse väiksemate molekulide jaoks. See geel tuvastab erinevused molekulaarsete ribade vahel. Lisaks DNA-le suudab see eraldada ka valke.

Kokkuvõte:

1.SDS-PAGE on valikuline geelelektroforeesi meetod, mida kasutatakse sellistes valdkondades nagu biokeemia, kohtuekspertiis, bioloogia ja geneetika, et eraldada valk nende elektroforeetilisest liikuvusest, samal ajal kui geelelektroforeesi kasutatakse tavaliselt bioloogiliste makromolekulide, näiteks DNA eraldamiseks, ribonukleiinhape (RNA) ja valk. Seda saab kasutada ka nanoosakeste eraldamiseks.

2. Looduslikul geelelektroforeesil on kahte tüüpi, nimelt: agaroosgeel ja polüakrüülamiidi geel.