Erinevus PCR-i ja reaalajas PCR-i vahel

PCR vs reaalajas PCR

PCR või polümeraasi ahelreaktsioon on moodsas molekulaarbioloogias revolutsiooniline avastus, mille töötas esmakordselt välja keemik Kary Mullis 1983. aastal. See võimaldab analüüsida mitme keeruka DNA järjestust. PCR põhiidee on see, et kaks praimerit, mis täiendavad DNA järjestuse vastaskülge, on orienteeritud üksteisele; praimerid toodavad komplementaarseid ahelaid, millest igaüks sisaldab teist praimerit. Seega on tulemuseks suures koguses järjestust, mis vastab DNA-le, mis asub kahe praimeri vahel. DNA polümeraasi ensüümi kasutatakse praimerite pikendamiseks PCR-is. DNA polümeraas on termostabiilne ensüüm ja sellel on võime püsida kõrgel temperatuuril (94 kuni 95 ° C), mida kasutatakse matriitsi DNA denatureerimiseks.

PCR hõlmab kolme etappi, nimelt korduvaid denatureerimise etappe, praimerite lõõmutamist ja DNA sünteesi. Selle reaktsiooni läbiviimiseks kasutatakse termotsüklilist masinat, nii et seda saab programmeerida temperatuuri kiireks ja täpseks muutmiseks. PCRi rakendused on kriminaaluurimine, DNA sõrmejäljed, patogeenide tuvastamine ja varajaste inimliikide DNA analüüs.

Mis on tavapärane PCR?

Tavalises PCR-is on kolm peamist etappi: DNA amplifikatsiooni etapp, PCR eraldamine ja produktide tuvastamine. DNA segmentide eraldamine toimub tavaliselt agaroosgeeli elektroforeesi abil. Seejärel värvitakse produktid eetimiimi bromiidiga. Lõpuks saavutatakse detekteerimine ribade visualiseerimisega geelidele UV-valguses. Seetõttu ei väljendata tavapärase PCR-i lõpptulemusi arvudena. Tavaliselt suudab tavaline PCR tuvastada ainult ühe parameetri.

Mis on reaalajas PCR?

Reaalajas PCR saab tuvastada toodete amplifikatsiooni, kuna tooted on sünteesitud. Tehnoloogia arenguga on PCR muutunud väga populaarseks tehnikaks, eriti toidus leiduvate bakterite tuvastamiseks ja tuvastamiseks. Reaalajas PCR kasutab fluorestsentstuvastuse võimalusega fluorestsentsvärvisüsteemi ja termotsüklit.

Mis vahe on tavapärase PCR-i ja reaalajas PCR-i vahel?

• Tavaline PCR on aeganõudvam, kuna amplifitseeritud PCR-toodete analüüsimiseks kasutatakse geelelektroforeesi. Seevastu reaalajas PCR on vähem aeganõudev, kuna see suudab tuvastada amplifikatsiooni reaktsiooni varajastes faasides.

• Reaalajas PCR kogub andmeid PCR eksponentsiaalse kasvu faasis, traditsiooniline PCR aga andmeid reaktsiooni lõpp-punktis..

• Tavalise PCR-i lõpp-punkti tulemused ei pruugi olla väga täpsed, kuid reaalajas PCR-i tulemused on väga täpsed.

• Reaalajas PCR on tundlikum kui tavaline PCR.

• Tavalisel PCR-l on väga halb eraldusvõime, samas kui reaalajas PCR suudab kõrge eraldusvõime tõttu tuvastada väga vähe muutusi.

• Tavalise PCR-i lõpptugevuse tuvastamisel on lühike dünaamiline ulatus, reaalajas PCR-i tuvastamisel aga lai dünaamiline ulatus.

• Erinevalt tavalisest PCR-st leitakse automatiseeritud tuvastamise tehnikad reaalajas PCR-is.

• Tavaline PCR on väga keerukas ja töömahukas rohkem kui reaalajas PCR.

• Erinevalt reaalajas PCR-ist ei saa tavaline PCR eristada surnud ja elusaid baktereid.

• Reaalajas PCR kasutab toodete tuvastamiseks fluorestsentsvärvisüsteemi, tavapärases PCR-is agaatriumgeeli söötme ribade visualiseerimiseks kasutatakse etiidiumbromiidi ja UV-valgust..